Los receptores de trasplante de órganos enfrentan riesgos significativos por infecciones agudas o crónicas que amenazan la supervivencia del injerto. El virus BK (BKV) y el virus JC (JCV) son dos virus oportunistas prominentes, y pueden causar nefropatía asociada a poliomavirus y pérdida del riñón trasplantado en pacientes en un estado inmunosupresor después del trasplante de riñón. Por lo tanto, la detección oportuna y el monitoreo sostenido de la carga viral son indispensables. Sin embargo, los métodos diagnósticos actuales siguen siendo limitados, y el desarrollo de nuevas tecnologías moleculares de detección es extremadamente urgente. Se optimizaron las secuencias y concentraciones de ARN CRISPR (crRNA), la concentración de Cas13a y los cebadores para la amplificación por polimerasa recombinante (RPA) para la detección de BKV y JCV. A continuación, se diseñó y fabricó un innovador chip microfluídico de gotas dobles, integrado con CRISPR (ddCRISPR) para detectar cualitativamente simultáneamente BKV y JCV. Posteriormente, el ensayo ddCRISPR fue verificado con muestras clínicas. Luego, se desarrolló una tira de flujo lateral combinada con CRISPR (LFCRISPR) para la detección de BKV y JCV en entornos con recursos limitados. Se estableció y optimizó un sistema de reacción RPA-CRISPR en un solo paso para la detección de BKV y JCV. ddCRISPR puede detectar simultánea y rápidamente BKV y JCV con alta sensibilidad (10 copias/ml para BKV y 1 copia/ml para JCV) y proporcionar cuantificación absoluta, lo que es adecuado para la detección de la carga viral y propicio para el tratamiento personalizado y preciso de receptores de trasplante de órganos. LFCRISPR simplificó el proceso operativo mediante una lectura visual sencilla, facilitando el cribado viral después del trasplante de órganos. Estas plataformas incorporan pruebas moleculares en el modelo de tratamiento de trasplantes, reduciendo costos, prolongando la supervivencia del injerto, mejorando los resultados clínicos del manejo postoperatorio en el trasplante renal y mejorando la calidad de vida de los pacientes.
Keywords
virus BK (BKV); virus JC (JCV); trasplante renal; repeticiones cortas palindrómicas regularmente espaciadas (CRISPR); microfluídico; ensayo de flujo lateral (LFA)