Tests basés sur CRISPR pour la détection des infections par les virus BK et JC après transplantation rénale

Yu Liu ,  

Jing-Song Xu ,  

Li Cao ,  

Shuang Yang ,  

Tian-Ming Li ,  

Hai-Qian Huang ,  

Jun-Heng Zhang ,  

Xue Zhao ,  

Qian Liu ,  

Shun Li ,  

Min Li ,  

Hua Wang ,  

Abstract

Les receveurs de transplantation d’organes sont confrontés à des risques importants d’infections aiguës ou chroniques qui menacent la survie du greffon. Le virus BK (BKV) et le virus JC (JCV) sont deux virus opportunistes importants, susceptibles de provoquer une néphropathie associée au polyomavirus et une perte du rein greffé chez les patients en état d’immunosuppression après une transplantation rénale. Par conséquent, la détection en temps opportun et la surveillance continue de la charge virale sont indispensables. Cependant, les méthodes diagnostiques actuelles restent limitées, et le développement de nouvelles technologies de détection moléculaire est extrêmement urgent. Les séquences et concentrations de l’ARN CRISPR (crRNA), la concentration de Cas13a et les amorces pour l’amplification par recombinase polymérase (RPA) ont été optimisées pour la détection de BKV et JCV. Ensuite, une nouvelle puce microfluidique à double goutte a été conçue et fabriquée, puis intégrée avec CRISPR (ddCRISPR) pour détecter simultanément qualitativement BKV et JCV. Par la suite, le test ddCRISPR a été validé avec des échantillons cliniques. Ensuite, une bande de flux latéral combinée au CRISPR (LFCRISPR) a été développée pour la détection de BKV et JCV dans des environnements à ressources limitées. Un système de réaction RPA-CRISPR en un seul pot a été établi et optimisé pour la détection de BKV et JCV. Le ddCRISPR peut détecter simultanément et rapidement BKV et JCV avec une grande sensibilité (10 copies/ml pour BKV et 1 copie/ml pour JCV), et fournir une quantification absolue, ce qui convient à la détection de la charge virale et favorise un traitement personnalisé et précis des receveurs de transplantation d’organes. LFCRISPR simplifie le processus opérationnel grâce à une lecture visuelle simple, facilitant le dépistage viral après transplantation d’organe. Ces plateformes intègrent le test moléculaire dans le modèle de traitement de transplantation, réduisant ainsi les coûts, prolongeant la durée de survie du greffon, améliorant les résultats cliniques de la prise en charge postopératoire lors de la transplantation rénale, et améliorant la qualité de vie des patients.

Keywords

virus BK (BKV); virus JC (JCV); transplantation rénale; répétitions palindromiques courtes régulièrement espacées (CRISPR); microfluidique; test à flux latéral (LFA)

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